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[赛医学]病毒核酸检测标准化：标准物质的种类及制备


病毒核酸检测(nucleic acid test ， NAT)现已广泛应用于血液及其制品的病毒筛查、临床抗病毒药物治疗疗效监测等 。 但核酸检测容易受到检测样本的基质效应和检测病毒的基因变异等多种因素的影响 ， 使得不同的实验室应用不同的方法学进行核酸检测的结果 ， 在量值、灵敏度和特异性方面常出现较大的差异 。 为使不同实验室 ， 不同方法间检测的结果具有可比性 ， 就必须使检测标准化 ， 而标准物质是检测标准化的核心 。
PART1标准物质的种类由于血清中病毒核酸的量值不能单独应用物理和(或)化学的方法进行准确测定 ， 必须通过一定的核酸扩增或杂交过程并经相应的数据处理后才能推测出血清中病毒核酸的原始数值 。 所以传统意义的一级参考测量程序(物理和化学方法)和一级标准物质在核酸检测中还不存在 。 病毒核酸检测标准物质目前通常分为国际标准物质、国家或地区标准物质和实验室内部的工作制剂等三个等级 。
1.核酸检测用国际标准物质(reference material)
是指由WHO 多中心研究后由专门委员会认可的 ， 经过稳定性和组成完整性检验的 ， 在国际范围内用作有关量的其他标准定值基础的物质 ， 目前均由英国国家生物学标准物质和质控物研究所(National Institute for Biological Standards and Control ， NIBSC)研制并提供 。 NIBSC于1997年建立了第一代HCVRNA 核酸检测用国际标准 ， 分别于1999年、2000年、2002年和2003年建立了第一代HIVG1 RNA、HBV DNA、Humanparvovirus B19和HAV RNA 核酸检测用国际标准(表9G1) 。 核酸检测用国际标准物质没有高纯度要求 ， 其产量也没必要满足常规实验室要求 ， 通常制备一批次可供5～10年应用 。
2.国家或地区标准物质
主要面向一个国家或地区 。 在有国际标准物质的情况下 ， 可溯源至国际标准 ， 如卫生部临床检验中心研制的HBV DNA 和HCV RNA 国家标准物质 。 在没有国际标准的情况下 ， 国家标准物质管理组织可以建立国家标准物质并自行规定单位 ， 诸如意大利HCV RNA 国家标准物质 。
3.实验室内部用的核酸检测工作制剂
是指相关诊断试剂生产厂家 ， 在实际工作中用于校准或检查实物量具、测量仪器或标准物质的工作标准 。 如Roche、Chiron 和Bayer等公司自己用的核酸检测工作标准国家或地区标准物质和实验室内部的工作制剂等的量值应溯源至国际标准物质 。 其测定值的不确定度也应大于并包含上一级标准物质的不确定度 。
目前已有病毒核酸国际和国家标准物质
【[赛医学]病毒核酸检测标准化：标准物质的种类及制备】
[赛医学]病毒核酸检测标准化：标准物质的种类及制备
本文插图
[赛医学]病毒核酸检测标准化：标准物质的种类及制备
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PART2标准物质的制备目前 ， 病毒核酸检测用国际标准物质的制备已经程序化 ， HCV RNA、HIVG1 RNA、HBV DNA、Humanparavo virus B19和HAV RNA的第一代国际标准物质 ， 都是按照WHO 的固定程序制备的 。
其过程包括原材料的选择和分装、稳定性和均匀性检验、多中心合作研究定值、WHO认可三个阶段 。
下文就原材料的选择和分装进行介绍 。
一、、原材料的选择原则在选择用于制备病毒核酸标准物质的原材料时 ， 通常应该遵循如下基本原则 。
1.基质相同或相近的原则
核酸检测用标准物质所选的原始材料 ， 基质应和使用的要求相一致或尽可能接近 ， 这样可以消除方法基质效应引入的系统误差 。 如临床日常检测的标本使用的是血清(浆) ， 则相应标准物质的基质也应是血清(浆)；如临床标本的基质为细胞 ， 则标准物质的基质亦应为细胞 。 目前WHO认可的核酸用国际标准物质所选的原始材料 ， 是应用混合的阴性血浆[HBGsAg(-)、抗HCV(-)、HCV RNA(-)、HIV 抗原检测(-)、HIVG1 RNA(-)、HAV RNA(-)和Parvovirus B19(-)]稀释阳性血浆得到 ， 阳性血浆中含有相应经过灭活处理的野生型病毒 。


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