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推荐中国再添新冠灭活疫苗：由高福等学者领衔，已在动物实验显示巨大潜力( 二 )


推荐中国再添新冠灭活疫苗：由高福等学者领衔，已在动物实验显示巨大潜力
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值得注意的是 ， 所有这些毒株都是从Vero细胞中分离出来的 ， 并已获得世界卫生组织的疫苗生产认证 。 这些Vero细胞通过患者的咽喉拭子感染 ， 而不是其他细胞系 ， 以防止在病毒培养和分离过程中可能发生的突变 。 高效增殖和高遗传稳定性是研制灭活疫苗的关键 。 他们首先发现在三种病毒株中 ， HB02株的88个Vero细胞复制效果最佳 ， 产生的病毒产量最高(图1a) 。 因此 ， 研究者选择HB02株进一步开发灭活SARS-CoV-2疫苗(BBIBP-CorV) 。 HB02株和其他从国内和国际来源的SARS CoV-2毒株的全基因组序列的比较表明：HB02毒株与其他病毒株同源 ， 并证明了主要保护性抗原(刺突蛋白质)有100%的同源性 。 这说明具有广泛对抗各种SARS-CoV-2毒株的潜力(补充图1和补充图2) 。 为了获得适于高产的病毒培养基 ， 研究者对HB02株进行了纯化 ， 并在Vero细胞中传代产生了P1病毒培养基 。 将P1培养基在Vero细胞上进行适应性培养、传代和扩增 。 研究者将经过7代适应化的毒株(BJ-P-0207)作为生产疫苗的原种子(BJ-P1) 。 为评价遗传稳定性 ， 研究者对其再传代3次 ， 得到P10病毒培养基 。 通过深度测序分析 ， 我们对HB02株和P10株进行了全基因组测序 ， 结果显示它们的序列同源性大99.95% 。 此外 ， 在P10原料病毒的全序列中 ， 包括弗林分裂位点附近也没有发现氨基酸变异 ， 这些结果表明HB02毒株具有较高的遗传稳定性 ， 有利于进一步的发展 。
为了高效制造 ， 研究者建立了基于新型篮式反应器载体的BBIBP-CorV的原料生产策略(图1b) 。 对Vero细胞中P7培养基的生长动力学分析显示 ， 培养基病毒能够有效复制 ， 在感染后48-72小时(hpi)达到最高滴度超过7.0 log10 CCID50 ， 感染多重度(MOI)为0.01-0.3(图1c) 。 为了灭活病毒产生 ， 研究者在2-8℃ ， 以1:40的比例将丙酸内酯与收获的病毒溶液充分混合 。 病毒的3批灭活消除了病毒的感染性 ， 验证了灭活过程良好的稳定性和重复性(图1d) 。 Western-blotting分析显示 ， 疫苗库中含有病毒结构蛋白(保护性抗原)(图1e) 。 负染色的电子显微镜图像显示椭圆形病毒颗粒 ， 直径约为100 nm(图1f) 。
BBIBP-CorV的免疫原性
为评估BBIBP-CorV的免疫原性 ， 研究者采用不同免疫方案和不同剂量(2、4、8μg/剂)疫苗注射BALB/c小鼠 。
单剂量免疫组在第0天(D0)以三种剂量腹腔给药 ， 分别是高(8 μg/剂)、中(4μg/剂)、低剂量(2μg/剂)的BBIBP-CorV ， 观察注射后7、14、21、28天中和抗体(NAb)水平 。 结果表明 ， 高、中、低剂量组的血清转化速率在免疫后7天都达到100% ， 同时免疫效果与时间相关(图2,补充表1)。 低、中剂量组的中和抗体水平在7、14和21天显示显著的变化 ， 但21天到28天之间无显著差异 。 在高剂量组中 ， 仅在7 、14天观察到显著变化(图2a) 。
双剂免疫组采用不同免疫方案(第0天/第7天、第0天/第14天、第0天/第21天分别进行免疫) 。 双剂量免疫中的高、中、低剂量组在第二次免疫后7天的血清阳性达到100%(图2 b,补充表1) 。 高、中剂量的双剂免疫方案的免疫原性明显高于单剂量免疫方案 。 采用第0天/第21天方案的第二次免疫后7天 ， 其中和抗体水平最高 。
研究者还测试了三剂免疫程序的免疫原性 。 他们在0天、7天和时14 天在小鼠腹腔接种三种剂量的疫苗 ， 分别是高(8μg /剂)、中(4μg /剂)或低(2μg /剂)疫苗 (图2c) 。 在第7、14、21、28天测定各组的中和抗体水平 ， 在第一次免疫后第7天 ， 三组血清转化率均达到100%(图2c ， 补充表1) 。
结果显示 ， 三剂 (0天/7天/14天)免疫接种方案在第28天时的中和抗体水平 ， 均高一剂免疫接种方案(图2a和2c) 。 此外 ， 他们分析了单剂、双剂(0天/21天)和3剂(0天/7天/ 14天)免疫接种小鼠采用高、中、低剂量疫苗的中和抗体水平 ， 并在第一次免疫后的28天检测中和抗体水平 ， 以保持相同的起止点 。 结果显示 ， 三剂量(0天/7天/14天)免疫接种方案的免疫原性高于单剂量和双剂量免疫接种方案(图2d) 。


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