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：协和：新冠肺炎核酸与抗体联合检测，结果如何判读？

：协和：新冠肺炎核酸与抗体联合检测，结果如何判读？
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2019-nCoV属于冠状病毒β属 ， 基因组为线性的单股正链RNA ， 是已知可感染人类的第7种冠状病毒 。然而 ， 临床上并不是所有2019-nCoV感染者都能通过常规标本测出2019-nCoV核酸 ， 目前多地多家临床机构已出现2019-nCoV核酸检测假阴性情况 ， 从而导致核酸检测结果与临床症状、影像学检查不相符 。这其中涉及到样本采集与存放 ， 病毒感染的部位 ， RNA提取方法 ， 核酸检测试剂盒质量问题等多方面因素 ， 给2019-nCoV感染诊断及防疫防控带来巨大的影响 。
《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第七版）》已经将抗体检测结果列入到确诊病例标准 ， 并指出抗体检测可以作为疾病诊疗动态检测的重要指标 。
疑似病例同时具备以下病原学或血清学证据之一者：
实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性；
病毒基因测序 ， 与已知的新型冠状病毒高度同源；
血清新型冠状病毒特异性IgM抗体和IgG抗体阳性；
血清新型冠状病毒特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期较急性期4倍及以上升高 。
病毒感染机体后 ， 免疫系统对病毒进行免疫防御并产生特异性抗体 。其中特异性IgM抗体是机体感染后早期产生的抗体 ， 可提示现行感染或新近感染 。IgG抗体是再次免疫应答产生的主要抗体 ， 提示病情进入恢复期或存在既往感染 。
因此 ， 免疫球蛋白M（immunoglobulin M ， IgM）和免疫球蛋白G（immunoglobulin G ， IgG）抗体联合检测不仅可以对感染性疾病进行早期诊断 ， 而且有助于对机体感染阶段的评估 。
抗体检测假阴性及假阳性结果分析
假阳性和假阴性结果会影响临床诊断 。为提高2019-nCoV抗体检测的准确性 ， 有必要对可能出现的及原因进行深入分析 。
一、抗体检测假阴性
1、防腐剂和抗凝剂：采用防腐剂叠氮化钠、抗凝剂EDTA等处理标本 ， 会抑制辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase ， HRP）的活性 ， 造成ELISA假阴性 。
2、标本保存不当：当标本在冰箱中保存过久时 ， 血清中IgG聚合成多聚体 ， 且抗体免疫活性减弱 。
3、实验员操作失误或试剂盒保存不当：试剂使用前未平衡至室温 ， 试剂用量不足 ， 温育时间或温度不足；试剂未按规定保存 ， 受到污染或失效等 。
4、层析过快：抗原抗体复合物尚未与检测线上的抗体结合 ， 就越出检测线 ， 造成GICA假阴性 。
二、抗体检测假阳性
1、溶血或红细胞标本：红细胞的细胞内液中各种酶可与底物发生非特异性反应 ， 且血红蛋白中亚铁血红素与HRP活性类似 ， 可催化底物 ， 造成ELISA检测假阳性；检测区堆积形成颜色较浅的非特异性条带 ， 干扰目视法判定胶体金试纸结果 。
2、纤维蛋白的影响：由于标本凝集不全或离心转速过低、时间太短 ， 血清中的纤维蛋白未完全析出 ， 形成的块状或絮状物堵塞洗板机头 。
3、细菌污染标本：菌体内可能含有内源性HRP ， 造成ELISA假阳性结果；此外 ， 疏水性的菌体碎片与金标粒子或捕捉抗体发生结合 ， 影响GICA判读 。
4、患者自身原因：体内存在自身抗体、嗜异性抗体等 ， 如患有某些基础疾病或免疫功能异常 ， 或长期服用某种药物 ， 可产生异常蛋白抗体或特殊物质 ， 如类风湿因子、甲胎蛋白、补体等 ， 具有一定吸附作用 ， 造成抗体检测假阳性 。
核酸与抗体联合检测结果解读
核酸与抗体联合检测可提高检测效率 ， 当联合检测结果出现以下情况时 ， 需要综合分析判断进行结果的解读 。
一、核酸检测阳性时 ， 抗体检测出现阴性或阳性结果
（1）核酸阳性 ， IgM和IgG均为阴性
患者可能处于2019-nCoV感染“窗口期”：“窗口期”是指从人体感染病毒后到外周血中能够检测出病毒抗体的这段时间 ， 一般为２周 。这段时间内 ， 无法检测血液中的病毒抗体 ， 因此 ， IgM和IgG均为阴性 。此时处于感染早期 ， 病毒不断复制 ， 核酸载量呈指数递增 ， 达到核酸检测下限 ， 核酸检测呈阳性 。核酸检测较血清抗体检测的优势在于缩短了感染检出窗口期 ， 可及早发现感染者 。


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